Servicios

PROTEOMICS

ibmcp - servicios proteomica

Staff

Susana Tárraga Herrero · Responsable del Servicio

Contact

Tel.: +34 963 877 858 Ext.: 78618

Description

El Servicio de Proteómica del IBMCP tiene por objeto ofrecer apoyo tecnológico a los grupos de investigación del IBMCP, de los Institutos de la UPV y de otros que lo requieran que precisen de las nuevas herramientas de la Proteómica.

El laboratorio de Proteómica cuenta con el equipamiento necesario para ofrecer dos prestaciones principales.

Por un lado, se puede llevar a cabo la separación de mezclas proteicas, simples o complejas, mediante electroforesis bidimensional (2D), pudiéndose aplicar la tecnología 2D-DIGE (two-dimensional difference gel electrophoresis), para el estudio de expresión diferencial entre distintas muestras.

Por otro lado, el servicio cuenta con un FPLC para la separación de proteínas mediante cromatografía líquida.

Rules

2D y 2D-DIGE - Purificación de proteínas Características de las muestras • Tiras de acrilamida de 7cm: se necesitan, como mínimo, 150 microgramos de proteína. • Tiras de acrilamida de 24cm: se necesitan, como mínimo, 300 microgramos de proteína. Lo ideal es que, en ambos casos, las proteínas estén resuspendidas en un tampón determinado (que el usuario deberá describir en la hoja de solicitud), en un volumen máximo de 200 microlitros. Para la realización de un experimento DIGE, serán necesarias como mínimo, 4 réplicas biológicas de las muestras a comparar. Por ejemplo, 4 muestras control y 4 muestras problema, cada una de ellas con 300 microgramos de proteína. Es aconsejable que de una de las muestras se entregue más proteína (unos 500 microgramos) para hacer un gel de prueba previo al DIGE. Extracción de proteínas Es muy importante que desde el proceso inicial de extracción de proteínas, el usuario tome precauciones frente a la contaminación con queratinas de sus muestras, utilizando guantes y bata en todo momento. Entrega de resultados Una vez terminado el trabajo, el servicio entregará al usuario un informe que incluirá la descripción de los métodos empleados, así como las imágenes de los geles. NOTA: Si estos resultados, o parte de ellos, dan lugar a una publicación, debería indicarse en los Materiales y Métodos o en los agradecimientos que han sido realizados en el Servicio de Proteómica del Instituto de Biología Molecular y Celular de Plantas (IBMCP) de la UPV. Tarifas Servicio ofertado Usuarios internos Centros públicos Empresas privadas Separación de proteínas 2D Electroforesis (con tinción SYPRO o plata) Gel 24x20 cm 65 100 150 Gel 7x8 cm 48 85 125 2D Electroforesis (sin tinción, para WESTERN) Gel 24x20 cm 55 90 130 Gel 7x8 cm 35 58 83 Tinciones Tinción de plata (gel 24x20) 45 70 100 Tinción de plata (gel 7x8) 36 60 87 Tinción Coomassie (gel 24x20) 20 35 50 Tinción Coomassie (gel 7x8) 10 18 25 Tinción Fluorescente SYPRO Ruby (gel 24x20) 70 120 150 Tinción Fluorescente SYPRO Ruby (gel 7x8) 30 40 50 Tinción Fluorescente de fosfoproteínas PRO-Q (gel 24x20) 70 120 150 Tinción Fluorescente de fosfoproteínas PRO-Q (gel 7x8) 30 40 50 Análisis de expresión diferencial 2D-DIGE Consultar en el Servicio Purificación de proteínas Normas de funcionamiento del FPLC El usuario entregará su muestra (centrifugada) y los tampones necesarios, que serán filtrados en el servicio. El usuario también comunicará el protocolo que se ha de introducir en el programa. El servicio cuenta con las siguientes columnas: Cromatografía de filtración (propias del servicio): Superdex 75 10/300 GL (Mr: 3-70 KDa) Superdex 200 10/300 GL (Mr: 10-600 KDa) Cromatografía de intercambio iónico (el servicio compra cajas con 5 columnas y el usuario comprará la suya propia en el primer uso): HiTrap Q 5/50 HP HiTrap S 5/50 HP En el caso de cromatografía de afinidad, el usuario será el que aporte su propia columna. A la hora de inyectar las muestras, si el volumen de la misma es inferior a 5 ml, todo el proceso cromatográfico se podrá realizar en el servicio, pero si es superior a 5 ml, el usuario deberá traer la columna cargada con su muestra Para este caso, el servicio cuenta con una bomba peristáltica que podrá ser solicitada por el usuario para facilitarle el trabajo. En el servicio se realizará el lavado y la elución de proteínas. Tarifas: Cromatografía de afinidad: 16€ Cromatografía de filtración: 22€ Cromatografía de intercambio iónico: 80€* * Cuando el usuario realiza una cromatografía de intercambio iónico adquiere su propia columna, que podrá reutilizar en sucesivas ocasiones. Una vez adquirida la columna, el precio de las cromatografías de intercambio iónico siguientes será de 16€.

Equipment

Separación de Proteínas:

Ettan IPGphor3 Ettan IPGphor3

Ettan DALTsix Ettan DALTsix

Captura de Imágenes de los Geles:

• Typhoon TRIO Typhoon TRIO

• ImageScanner ImageScanner

Preparación de Proteínas para su identificación:

• Ettan Spot Picker Ettan Spot Picker

• Ettan TA Digester Ettan TA Digester

Purificación de Proteínas:

• ÄKTA purifier ÄKTA purifier

 

Parte del equipamiento científico de este servicio ha sido cofinanciado con Fondos FEDER